一般情況下,我們都是先種細胞養(yǎng)過夜再轉(zhuǎn)染,這叫forward transfection,即使起始細胞量較低,細胞活性最好。
若轉(zhuǎn)染小rna,可同時進行種板和轉(zhuǎn)染,即細胞懸液和轉(zhuǎn)染復(fù)合物混合在一起,放入細胞培養(yǎng)皿中。reverse transfection。但我試過了。細胞活性不如傳統(tǒng)。forward transfection好吧,這么多protocol建議添加更多的細胞。
如果是轉(zhuǎn)染dna,通常不建議這樣做,或者誠實forward,一天不差。
此外,lipo3000毒性并沒有想象的那么小,其他轉(zhuǎn)染試劑,如lipo2000,fugene沒有想象的那么大。但是換液還是需要的,最好6-8在一小時內(nèi)更換液體,否則細胞活性仍會降低。當(dāng)然,有些強細胞可能不怕,但我還沒有遇到過這么強的細胞。至少在我常用的細胞系中測試的幾種感染試劑使用一定量的流式。即使在感染6小時后更換液體,第二天也會有大約30%的細胞死亡。