一般情況下,我們都是先種細(xì)胞養(yǎng)過夜再轉(zhuǎn)染,這叫forward transfection,即使起始細(xì)胞量較低,細(xì)胞活性最好。
若轉(zhuǎn)染小rna,可同時進(jìn)行種板和轉(zhuǎn)染,即細(xì)胞懸液和轉(zhuǎn)染復(fù)合物混合在一起,放入細(xì)胞培養(yǎng)皿中。reverse transfection。但我試過了。細(xì)胞活性不如傳統(tǒng)。forward transfection好吧,這么多protocol建議添加更多的細(xì)胞。
如果是轉(zhuǎn)染dna,通常不建議這樣做,或者誠實forward,一天不差。
此外,lipo3000毒性并沒有想象的那么小,其他轉(zhuǎn)染試劑,如lipo2000,fugene沒有想象的那么大。但是換液還是需要的,最好6-8在一小時內(nèi)更換液體,否則細(xì)胞活性仍會降低。當(dāng)然,有些強(qiáng)細(xì)胞可能不怕,但我還沒有遇到過這么強(qiáng)的細(xì)胞。至少在我常用的細(xì)胞系中測試的幾種感染試劑使用一定量的流式。即使在感染6小時后更換液體,第二天也會有大約30%的細(xì)胞死亡。