pi它不能穿透細(xì)胞膜，被排除在活細(xì)胞之外，但可以通過受損的細(xì)胞膜染色核染色。利用這一特性，通常是calcein-am、hoechst 33258或 hoechst 33342等活細(xì)胞熒光探針同時(shí)染色和識(shí)別活細(xì)胞和死細(xì)胞，用于細(xì)胞凋亡的研究。它也可用作多種熒光染色的復(fù)染劑，包括直接或間接的熒光抗體檢測(cè)，mrna原位雜交、細(xì)胞結(jié)構(gòu)特異性熒光探針檢測(cè)和組織染色。pi細(xì)胞周期檢測(cè)也可以單獨(dú)染色。

本品溶于水pi 儲(chǔ)存液濃度為1mg/ml，用適當(dāng)?shù)木彌_液稀釋工作液。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

英文名：2,7-diamino-9-phenyl-10 ( ** thylaminopropyl)-phenanthridium iodide methiodide.

cas號(hào)：25535-16-4

分子式：c27h34i2n4

分子量：668.4

外觀：暗紅色結(jié)晶

純度：≥95% by hplc

溶解:溶于水(1 mg/ml）

熒光光譜 （fluorescence spectral）：水溶液，pi的ex/em= 493/636 nm；pi-核酸的ex/em= 535/617 nm；氙氣燈、泵弧燈或488 nm氬離子激光刺激。通常，使用流式細(xì)胞儀fl2通道檢測(cè)。

使用方法

1. 貼壁細(xì)胞復(fù)染步驟(熒光顯微鏡檢測(cè))

1） 樣本準(zhǔn)備:根據(jù)自己的樣本選擇合適的步驟來(lái)固定細(xì)胞。pi染色通常在其他染色完成后進(jìn)行。pi復(fù)染需要細(xì)胞透化。

2） rnase酶處理：如果樣品采用多聚甲醛、甲醛或戊二醛固定，則需要進(jìn)行rnase處理。如果樣品用甲醇/醋酸或丙酮固定，通常不需要此操作。a，于2×ssc (0.3 m nacl,0.03 m sodium citrate,ph 7.0)溶液平衡樣本；b，把這個(gè)產(chǎn)品放在含100 μg/ml dnase-free rnase的2×ssc溶液中37°c孵育20 min；c，用2×ssc溶液清洗樣品3次，每次1 min。

3） 復(fù)染：a，于2×ssc (0.3 m nacl,0.03 m sodium citrate,ph 7.0)溶液平衡樣本；b，直接用2×ssc稀釋1 mg/ml(1.5 mm)pi儲(chǔ)存液 1:3000，500 nm的pi工作液。通常加300 μl染料足以用來(lái)制作覆蓋玻片的細(xì)胞。1-5 min。c，2×ssc清洗幾次，流出多余的液體，加入抗淬滅劑密封(yeasen,cat#36308es08)。d，選擇合適的熒光顯微鏡濾片進(jìn)行觀察。

2. 懸浮細(xì)胞復(fù)染步驟(流式細(xì)胞儀檢測(cè))

1）樣本準(zhǔn)備：根據(jù)自己的樣本選擇合適的步驟來(lái)固定細(xì)胞?；蚴褂靡韵虏襟E：

a. 收集細(xì)胞，密度約2×105~1×106。離心后吸去上清，輕彈管壁上剩余的液體重懸細(xì)胞。加入1 ml常溫存放的pbs；

b. 將所有重懸細(xì)胞轉(zhuǎn)移到4 ml于-20oc預(yù)冷無(wú)水乙醇在高速渦旋混合的同時(shí)，用槍緩慢向乙醇中添加細(xì)胞懸液。-20oc乙醇中固定5-15 min。

c. 離心收集細(xì)胞，去除乙醇。彈松細(xì)胞后加入輕彈管壁5ml室溫的pbs。允許細(xì)胞水化15 min；

2）復(fù)染

a. 用染色液(100 mm tris,ph 7.4,150 mm nacl,1 mm cacl2 ,0.5 mm mgcl2 ,0.1% nonidet? p-40）稀釋1 mg/ml（1.5 mm）pi存儲(chǔ)液 1:500，3 μm的pi工作液。1 ml的pi染色液足以檢測(cè)每個(gè)細(xì)胞樣本。注：工作液的濃度可根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)或直接調(diào)整pbs，hbss等待緩沖液直接稀釋pi儲(chǔ)存液到所需濃度。

b. 樣品制備的最后一步是離心收集細(xì)胞，去除上清，用手輕彈管壁彈松細(xì)胞，加入1 ml的pi染色工作液。室溫孵化15 min之后，流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞分析。如果用顯微鏡觀察，則需要在新鮮緩沖液中去除和重新懸浮細(xì)胞。吸收1滴懸浮液到載玻璃，蓋上玻璃后觀察。

3. 染色質(zhì)fish復(fù)染步驟

1）樣品準(zhǔn)備：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)步驟制備樣品。染前的最后一步是用去離子水清洗樣品，以去除玻璃上殘留的緩沖液。室溫干燥。這一步有助于減少非特異性背景染色。

2）復(fù)染

a. 工作液制備：使用pbs1 直接稀釋緩沖液mg/ml(1.5 mm)的pi儲(chǔ)存液1:10001.5 μm的pi染色工作液。滴加300 μl工作液直接到樣本。必要時(shí)，將新鮮制備的工作液添加到工作液中rnase a(最終濃度:10 μg/ml）。在載玻片上均勻分布染液的塑料蓋玻片。在室溫避光條件下孵化樣品30 min；如果加入rnase則37oc孵育。

特殊染色及酶組織化學(xué)染色及診斷

宮頸脫落細(xì)胞的組織細(xì)胞學(xué)特殊染色液

特殊染色液

宮頸癌染色液

巴氏染色液

染色劑

革蘭氏染色液試劑盒

臺(tái)盼藍(lán)染色液

hoechst 33342染色液

hoechst 33342

hoechst 33258染色液

hoechst 33258

pi染色液

化丙啶

dapi染色液

4',6-聯(lián)脒-2-苯基吲哚

細(xì)胞核染色

羧基-2',7'-二氯二乙酸熒光素琥珀酰亞胺酯

5（6）-羧基-2',7'-二氯熒光素二乙酸酯

5（6）-羧基二乙酸熒光素琥珀酰亞胺酯

5（6）-羧基熒光素二乙酸酯

二乙酸熒光素

乙酰甲酯鈣黃綠素

線粒體染色

羅丹明b高氯酸鹽

細(xì)胞內(nèi)脂和蛋白質(zhì)染色

尼羅紅

did細(xì)胞膜染色

did三氟甲磺酸鹽（5mm dmso溶液）

did三氟甲磺酸鹽

did 高氯酸鹽

dii細(xì)胞膜染色

dii三氟甲磺酸鹽

dii高氯酸鹽